Staphylococcus aureus merupakan salah satu mikrobial yang sering ditemukan pada permukaan gigi tiruan pasien denture stomatitis. Salah satu pencegahan dari penyakit ini adalah dengan menggunakan pembersih gigi tiruan. Gynura pseudochina merupakan tanaman herbal yang sering digunakan di Indonesia dan diketahui memiliki kandungan bioaktif sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektifitas ekstrak Gynura pseudochina konsentrasi 5%, 10%, 15%, 20%, 25% terhadap pertumbuhan bakteri S.aureus pada plat resin akrilik polimerisasi panas. Tiga puluh lima plat akrilik polimerisasi panas berukuran 10x10x1mm dikontaminasi dengan bakteri S.aureus, dibagi menjadi 7 kelompok (n=5). Sampel direndam pada ekstrak G.pseudochina, sodium hipolorit, dan akuades selama 30 menit. Sampel dipindahkan kedalam larutan NaCl 0,9% kemudian diambil 0,1 ml dibenihkan pada media PCA lalu diinkubasi selama 24 jam. Jumlah koloni S.aureus dihitung menggunakan colony counter. Data dianalisis menggunakan uji one way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc Games-Howell. Terdapat perbedaan yang signifikan secara statistik pada hampir seluruh kelompok (p<0,05) kecuali kelompok perlakuan ekstrak 5% dengan 10% dan kelompok perlakuan ekstrak 5%, 10% dengan kontrol negatif (akuades) (p>0,05). Kesimpulan dari penelitian ini adalah ekstrak G.pseudochina 15%, 20%, 25% efektif dalam menghambat pertumbuhan koloni bakteri S.aureus dan konsentrasi 25% merupakan konsentrasi paling efektif.