Air minum isi ulang adalah air minum yang diproses melalui penjernihan dan tidak memiliki merek yang di produksi oleh depot air minum isi ulang. Air minum yang dikonsumsi harus terhindar dari cemaran mikroba, seperti Escherichia coli dan Salmonella sp. Tujuan: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbandingan jumlah koloni Escherichia coli dan Salmonella sp pada hari pertama dan hari kedua di depot air minum isi ulang. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian analitik observasional menggunakan pendekatan case control teknik Non Probability Sampling dengan metode Total Sampling yaitu mengambil seluruh sampel (9 sampel) di Kelurahan Tegal Sari I-III dilanjutkan identifikasi bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp terhadap sampel di Laboratorium Mikrobiologi FK UMSU. Hasil: Tidak terdapat Escherichia coli pada media EMB dan Salmonella sp pada media SSA. Kesimpulan: Pada penelitian ini tidak adanya pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella sp pada air minum yang didapat dari depot.